ਮੁੱਢਲੀ ਜਾਣ-ਪਛਾਣ
ਏਰੀਥਰੋਸਾਈਟ ਲਾਈਸੇਟ ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਸਰਲ ਅਤੇ ਆਸਾਨ ਤਰੀਕਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ, ਯਾਨੀ ਕਿ ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ ਨੂੰ ਲਾਈਸੇਟ ਨਾਲ ਵੰਡਣਾ, ਜੋ ਨਿਊਕਲੀਏਟਿਡ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਨਹੀਂ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦਾ ਅਤੇ ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਲਾਈਸੇਟ ਕਲੀਵੇਜ ਇੱਕ ਹਲਕੇ ਲਾਲ ਖੂਨ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਹੈ, ਜੋ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪਾਚਨ ਦੁਆਰਾ ਖਿੰਡੇ ਹੋਏ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ, ਲਿਮਫੋਸਾਈਟਸ ਦੇ ਵੱਖ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ, ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਲ ਖੂਨ ਦੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਐਸਿਡ ਕੱਢਣ. ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ ਦੇ ਲਾਈਸੇਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਅੱਗੇ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਕਲਚਰ, ਸੈੱਲ ਫਿਊਜ਼ਨ, ਪ੍ਰਵਾਹ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ, ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਅਤੇ ਕੱਢਣ ਆਦਿ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਵਰਤਣ ਲਈ ਨਿਰਦੇਸ਼
ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲ ਨਮੂਨਾ
1. ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਪੈਨਕ੍ਰੀਅਸ/ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਜਾਂ ਕੋਲੇਜੇਨੇਜ ਦੁਆਰਾ ਹਜ਼ਮ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ ਸੈੱਲ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਖਿੰਡਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਰੱਦ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
2. ਫਰਿੱਜ ਤੋਂ ELS ਲਾਈਸੇਟ ਨੂੰ 4' 'ਤੇ ਲਓ, 1:3-5 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰੈਸਿਪੀਟੇਟ ਵਿੱਚ ELS lysate ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ (3-5ml lysate ਨੂੰ 1ml ਦੇ ਸੈੱਲ ਸੰਕੁਚਿਤ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ), ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਉਡਾਓ ਅਤੇ ਮਿਲਾਓ।
3. 5-8 ਮਿੰਟ ਲਈ 800-1000rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕਰੋ ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੇ ਲਾਲ ਸਾਫ਼ ਤਰਲ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦਿਓ।
4. ਪ੍ਰਚਲਿਤ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ 2-3 ਵਾਰ ਲਈ ਹੈਂਕ ਦੇ ਘੋਲ ਜਾਂ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਕਲਚਰ ਘੋਲ ਨਾਲ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
5, ਜੇ ਕਰੈਕਿੰਗ ਪੂਰੀ/ਮੁਕੰਮਲ ਨਹੀਂ ਹੈ ਤਾਂ ਕਦਮ 2 ਅਤੇ 3 ਨੂੰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
6. ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਰੀਸਸਪੈਂਸ਼ਨ ਸੈੱਲ; ਜੇ ਆਰਐਨਏ ਕੱਢਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਡੀਈਪੀਸੀ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੜਾਅ 4 ਤੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਅਜਿਹਾ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।
ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ ਦਾ ਜੀਵਨ ਚੱਕਰ ਬਹੁਤ ਛੋਟਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਸਿਰਫ 120 ਦਿਨ, ਪਰ ਉਹ ਖੂਨ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਸ ਸਥਿਤੀ ਵਿੱਚ ਉਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਵਿਭਾਜਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਹ ਸਭ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵੰਡਣ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਸੈੱਲ ਬਹੁਤ ਕੀਮਤੀ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਲਈ ਬਹੁਤ ਲਾਭਦਾਇਕ ਹੈ। ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਧਾਰਨ ਹੈ, ਇਸ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਵੀ ਅੰਗ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਸਿਰਫ਼ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹਨ।